Sự hiện diện của Porcine parvovirus 1 (PPV1) ở lợn nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận

Download

Vietnam J. Agri. Sci. 2020, Vol. 18, No. 7: 495-503

Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 2020, 18(7): 495-503

www.vnua.edu.vn

SỰ HIỆN DIỆN CỦA PORCINE PARVOVIRUS 1 (PPV1) Ở LỢN

NUÔI TẠI HÀ NỘI VÀ VÙNG PHỤ CẬN

Nguyễn Văn Giáp, Mai Thị Ngân, Lê Văn Trường, Vũ Thị Ngọc,

Võ Văn Hiểu, Tạ Thị Kim Chung, Vũ Đức Hạnh, Huỳnh Thị Mỹ Lệ^*

Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam

^*Tác giả liên hệ: [email protected]u.vn

Ngày nhận bài: 19.05.2020

Ngày chấp nhận đăng: 24.06.2020

TÓM TẮT

Porcine Parvovirus (PPV1) là một trong những nguyên nhân chính gây rối loạn sinh sản ở lợn nái và là một yếu

tố kích hoạt trong cơ chế sinh bệnh của Porcine circovirus type 2. Ở Việt Nam, sự hiện diện và vai trò gây rối loạn

sinh sản của PPV1 đã được chứng minh, nhưng vẫn còn ít công bố về PPV1. Nghiên cứu này đã tìm hiểu sự có mặt

của PPV1 ở nhóm lợn giai đoạn nuôi thịt tại Hà Nội và vùng phụ cận bằng phản ứng huyết thanh học, PCR và phân

tích trình tự gen. Kết quả cho thấy 88,2% (60/68) mẫu huyết thanh có kháng thể kháng PPV1, với 18/60 mẫu có

kháng thể ở mức cao (HI >1/512). Hiện tượng virus huyết khá phổ biến khi phát hiện được ở 10/18 mẫu, với đặc

điểm không phụ thuộc vào hàm lượng kháng thể kháng PPV1. Kết quả giải mã một phần gen NS1 cho biết 10 chủng

PPV1 của Việt Nam thuộc nhóm di truyền 1. Cùng với các nghiên cứu khác, kết quả này cho thấy sự lưu hành của

PPV1 ở lợn nuôi tại Việt Nam.

Từ khóa: Porcine Parvovirus 1, phát hiện virus, đặc điểm sinh học phân tử.

Investigating the Presence of Porcine Parvovirus 1 (PPV1) in Pigs

in Hanoi and Neighboring Provinces

ABSTRACT

Porcine Parvovirus (PPV1) is one of the main pathogens inducing reproductive failure in sows. PPV1 is also

known as a triggering factor of porcine circovirus type 2. In Vietnam, the presence of PPV1 and its association with

reproductive disorders of sows had been confirmed. However, few publications are available on this topic. This study

investigated the occurrence of PPV1 in growing pigs risen in Hanoi and neighboring provinces by serology test, PCR

and genetic analysis. It was revealed that 88.2% (60/68) sera contained detectable antibodies against PPV1. Of

these, 18/60 sera had high antibody titres (HI >1/512). The viremia was detected at a high frequency (10 out of 18

tested sera) and was uncorrelated with the level of antibody titers against PPV1. The genetic analysis based on the

partial NS1- protein-coding gene showed that 10 PPV1 field strains were within genogroup 1. In combination with the

other studies, the current result supported that PPV1 is circulating in pigs in Vietnam.

Keywords: Porcine Parvovirus 1, virus detection, molecular characterization.

Alborali, 2012). PPV1 là mût trong nhąng mæm

1. ĐẶT VẤN ĐỀ

Røi loän sinh sân Ċ lợn do nhiều nguyên

nhån gåy ra, trong đò nhòm virus gåy bệnh

thāĈng gặp g÷m: Porcine reproductive and

respiratory syndrome virus (PRRSV), Classical

swine fever virus (CSFV), Porcine parvovirus 1

(PPV1), Porcine circovirus type 2 (PCV2),

Porcine pseudorabies virus (PRV),... (Pozzi &

bệnh gây røi loän sinh sân đã đāợc biết đến tĂ

rçt sĉm (Mayr & cs., 1968). Ngày nay, PPV1 còn

đāợc biết đến nhā là mût yếu tø kích hoät trong

sinh bệnh hõc cþa hûi chăng còi cõc Ċ lợn sau cai

sąa do PCV2 gây ra (Ellis & cs., 2000).

Về phân loäi, PPV1 thuûc hõ Parvoviridae,

là mût ADN virus sợi đćn dài khoâng 5kb (Ranz

& cs., 1989). Đến nay, ngāĈi ta đã phát hiện

495

Sự hiện diện của Porcine Parvovirus 1 (PPV1) ở lợn nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận

nuôi vĉi quy mô >100 và ≤100 lợn thðt. Trong

thêm mût sø loäi parvovirus mĉi Ċ lợn, ký hiệu tĂ

PPV2 đến PPV7. Khác vĉi PPV1 (thuûc giøng

Protoparvovirus), 6 loäi parvovirus phát hiện

trong vñng 10 nëm trĊ läi đåy thuûc giøng

Tetraparvovirus (PPV2- PPV3), Copiparvovirus

(PPV4- PPV6) và Chapparvovirus (PPV7) (Cadar

& cs., 2012; Xing & cs., 2018). Về cçu trúc, bû gen

PPV1 cò 2 khung đõc mĊ (ORF) chính mã hóa

cho protein phi cçu trúc NS1 và protein cçu trúc

(VP1 và VP2) (Ranz & cs., 1989; Bergeron & cs.,

1993). Gen mã hòa NS1 thāĈng bâo thþ hćn do cò

tøc đû đût biến thçp hćn khoâng 10 læn so vĉi gen

mã hóa protein cçu trúc (Ren & cs., 2013). Trong

các nghiên cău về đặc điểm sinh hõc phân tĄ và

xây dĆng cây phát sinh chþng loäi, các tác giâ

trên thế giĉi có thể dùng toàn bû genome (Oh &

cs., 2017), vùng gen mã hóa protein (Ren & cs.,

2013) hoặc gen mã hóa VP2 và/hoặc NS1 (Hao &

cs., 2011). Theo đò, PPV1 đāợc phân chia thành 3

(Ren & cs., 2013) hoặc 4 nhóm di truyền (Hao &

cs., 2011).

nëm 2017, đã cò 68 méu huyết thanh đāợc lçy Ċ

21 trang träi thuûc 6 đða phāćng là Hà Nûi,

Hāng Yên, Hâi Dāćng, Bíc Ninh, Hòa Bình và

Vïnh Phýc.

- Chþng PPV1 thuæn khiết, vô hoät đāợc

cung cçp bĊi Bû môn Vi sinh vêt - Truyền nhiễm,

Khoa Thú y, Hõc viện Nông nghiệp Việt Nam.

- H÷ng cæu chuût lang 10% và 1% pha trong

dung dðch PBS1x

- Đïa nhĆa 96 giếng đáy chą V

- M÷i phát hiện PPV1 và giâi mã gen đāợc

chõn theo nghiên cău trāĉc đåy (Xu & cs., 2012).

Trình tĆ 5’-3’ nhā sau: PPVF-AGTTAGAAT

AGGATGCGAGGAA và PPVR-AGAGTCTGT T

GGTGTATTTATTGG.

- Hóa chçt dùng tách chiết ADN tùng sø

g÷m: dung dðch ly giâi méu có chăa 27%

sucrose, 15mM trisodium citrate, 0,15M sodium

chloride, 1mM ethylene diaminetetraacetic acid,

1% sodium dodecyl sulphate, 200 µg/ml

Ở Việt Nam, vai trò gây bệnh cþa PPV1 đã

đāợc biết đến khá sĉm, tĂ nhąng nëm 1990 (H÷

Đình Chýc & cs., 1995). Trong mût thĈi gian dài,

các vçn đề liên quan tĉi PPV1 ít đāợc quan tâm

nghiên cău. Gæn đåy, kết quâ khâo sát sĆ lāu

hành cþa các genotype parvovirus Ċ khu vĆc

miền Trung tiếp tĀc khîng đðnh sĆ hiện diện cþa

genotype 1 (PPV1) Ċ lợn vĉi tỷ lệ phát hiện virus

là 52,7% (Nguyen Tran Trung & cs., 2019).

Nhìm làm rô hćn về sĆ lāu hành cþa PPV1 Ċ lợn

nuôi täi Việt Nam, nghiên cău này đã đāợc thĆc

hiện nhìm xác đðnh sĆ có mặt cþa PPV1 Ċ đàn

lợn nuôi täi Hà Nûi và vùng phĀ cên.

proteinase

phenol-chloroform-isoamyl

alcohol (25:24:1); isopropyl; c÷n 70% và đệm TE

(pH = 8).

- Kít PCR (Maxime PCR PreMix i-Taq,

25025, iNtRON, Hàn Quøc).

- Hóa chçt dùng phân tích sân phèm PCR

g÷m: agarose (Agarose EP Master, Biosesang,

Hàn Quøc); RedSafe Nucleic Acid Staining

Solution (21141, iNtRON, Hàn Quøc) và 100bp

DNA

ladder

(DM001-R500,

GeneDireX

Inc., Anh).

2.3. Phương pháp nghiên cứu

2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1. Nội dung nghiên cứu

2.3.1. Phát hiện kháng thể kháng PPV1

SĆ có mặt cþa kháng thể kháng PPV1 trong

huyết thanh lợn đāợc phát hiện bìng phân ăng

ngën trĊ ngāng kết h÷ng cæu (HI), thĆc hiện

theo mô tâ trāĉc đåy (Joo & cs., 1976), sĄ dĀng

h÷ng cæu chuût lang 1% và vĉi mût sø hiệu

chînh. CĀ thể, để loäi bó yếu tø gåy ngāng kết

h÷ng cæu, tiến hành þ huyết thanh xét nghiệm

vĉi h÷ng cæu chuût lang 10% theo tỷ lệ 1:1, để

qua đêm Ċ 4C. Méu đāợc coi là chuyển dāćng

tính huyết thanh hõc (dāćng tính) nếu Ċ đû pha

- Xác đðnh sĆ có mặt cþa kháng thể kháng

PPV1 và PPV1 trong méu huyết thanh lợn thðt.

- Tìm hiểu đặc điểm sinh hõc phân tĄ gen

mã hóa protein NS1 cþa các chþng PPV1.

2.2. Vật liệu

- Huyết thanh cþa lợn thðt trong giai đoän

40 đến 80 ngày tuùi. Méu đāợc lçy Ċ các hû chën

496

Nguyễn Văn Giáp, Mai Thị Ngân, Lê Văn Trường, Vũ Thị Ngọc,

Võ Văn Hiểu, Tạ Thị Kim Chung, Vũ Đức Hạnh, Huỳnh Thị Mỹ Lệ

(i) phāćng pháp xây dĆng cây phát sinh chþng

loäi là maximum likelihood; (ii) mô hình mô

phóng sĆ thay đùi nucleotide giąa các trình tĆ

gen đāợc lĆa chõn tĆ đûng bìng câu lệnh “-m

TEST”; (iii) măc tin cêy Ċ các nhánh cþa cây

phát sinh chþng loäi đāợc āĉc tính theo phāćng

pháp transfer bootstrap expectation (Lemoine &

cs., 2018), vĉi phép thĄ bootstrap lặp 1.000 læn.

Các trình tĆ tham chiếu đāợc chõn theo công bø

trāĉc đåy (Hao & cs., 2011; Chung & cs., 2020).

Chāćng trình iTOL (Letunic & Bork, 2019) đāợc

düng để chú thích cây phát sinh chþng loäi.

loãng >1/8 ngën trĊ hoàn toàn hiện tāợng ngāng

kết h÷ng cæu (Oravainen & cs., 2005). Cÿng

theo nghiên cău trāĉc đåy, hiệu giá HI 1/512

đāợc chõn làm møc để xác đðnh méu có hiệu giá

kháng thể Ċ măc cao (HI >1/512) và Ċ măc thçp

(1/16≤ HI ≤1/512) (Oravainen & cs., 2005).

2.3.2. Tách chiết ADN

(i) Ly giâi méu: 250µl huyễn dðch méu bệnh

phèm đāợc trûn đều trong 500µl dung dðch

sucrose/proteinase K; þ Ċ 56C/90 phút. (ii) Tách

pha ADN bìng phenol-chloroform-isoamyl

(25:24:1) bìng cách bù sung 200µl dung dðch

PCI vào øng méu sau khi ly giâi, vortex hún hợp

và ly tâm 12.000 vòng/phút/15 phút, Ċ nhiệt đû

4C. (iii) Tþa ADN: dùng øng Eppendorf mĉi,

trûn 450μl isopropyl và 450μl dðch nùi phía trên,

trûn đều; sau đò tþa ADN Ċ -20C/15 phút; thu

tþa bìng ly tâm, 12.000 vòng/phút/15 phút, Ċ

nhiệt đû 4C. (iv) RĄa tþa ADN bìng 1ml c÷n

70%; thu tþa bìng ly tâm, 12.000 vòng/phút/15

phút, Ċ nhiệt đû 4C; sau đò loäi bó hết c÷n và

hong khô Ċ nhiệt đû phòng trong 15 phút. (v)

Hòa tan tþa ADN trong 30µl đệm TE (pH = 8,0).

3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1. Phát hiện kháng thể kháng PPV1

Trong 68 méu huyết thanh lợn thðt xét

nghiệm, có 60/68 méu (88,2%) dāćng tính vĉi

kháng thể kháng PPV1 (hiệu giá HI ≥ 1/16). Kết

quâ biểu diễn Ċ hình 1 cho thçy biên đû dao

đûng hiệu giá kháng thể rûng, tĂ 1/16-1/4096.

CĀ thể, 60 méu dāćng tính đāợc xếp vào nhóm

có măc hiệu giá cao (18/60 méu, 30%) và nhóm

có măc hiệu giá thçp (42/60 méu, 70%).

Mût kết quâ nghiên cău công bø nëm 2012

cho biết kháng thể thĀ đûng kháng PPV1

truyền qua sąa đæu chî t÷n täi trong vòng 1

tháng và hiện tāợng chuyển dāćng tính huyết

thanh hõc Ċ lợn giai đoän nuôi thðt là kết quâ

đáp ăng miễn dðch chþ đûng chøng läi sĆ phći

nhiễm PPV1 tĆ nhiên (Stojanac & cs., 2012).

DĆa vào kết quâ dāćng tính huyết thanh hõc

(Hình 1), có thể suy luên hiện tāợng phći nhiễm

PPV1 là khá phù biến Ċ khu vĆc lçy méu. PPV1

là virus có mặt phù biến Ċ lợn, tuy nhiên tỷ lệ

dāćng tính là khác nhau giąa các nāĉc

(Saekhow & Ikeda, 2015; Chung & cs., 2020). Ở

Việt Nam, kết quâ khâo sát Ċ mût sø tînh miền

Trung bìng phāćng pháp PCR đã phát hiện

52,7% huyết thanh lợn thðt có PPV1 (Nguyen

Tran Trung & cs., 2019). Do vêy, tỷ lệ dāćng

tính huyết thanh hõc cao cþa nhóm lợn thðt

trong nghiên cău này là có thể giâi thích.

2.3.3. Phương pháp PCR phát hiện PPV1

Phân ăng PCR đāợc phøi trûn theo hāĉng

dén cþa nhà sân xuçt, m÷i đặc hiệu đāợc dùng Ċ

n÷ng đû cuøi cùng là 0,5pM cho múi m÷i xuôi-

m÷i ngāợc. Chu trình nhiệt g÷m: tiền biến tính

94C/5 phút; lặp läi 35 læn chu trình nhiệt sau:

biến tính 94C/30 giây, gín m÷i 57,1C/20 giây,

kéo dài 72C/30 giây. Phân tích sân phèm PCR

bìng phāćng pháp điện di trong thäch agarose

2%, có bù sung RedSafeNucleic Acid Staining

Solution 1x.

2.3.4. Phân tích trình tự nucleotide của PPV1

Phân tích biến đûng măc tāćng đ÷ng dõc

theo chiều dài gen mã hóa protein NS1 cþa

PPV1 đāợc thĆc hiện bìng phân phæn mềm

SimPlot (Lole & cs., 1999) vĉi các tham sø mặc

đðnh. Møi quan hệ di truyền cþa PPV1 đāợc xây

dĆng dĆa trên mût phæn trình tĆ gen mã hóa

protein NS1 (tĂ nucleotide 1470-1733). Phæn

mềm IQTREE phiên bân 1.6.2 (Nguyen & cs.,

2015) đāợc düng để xây dĆng cây phát sinh

chþng loäi vĉi các tham sø đæu vào nhā sau:

3.2. PCR phát hiện PPV1 trong mẫu

huyết thanh

Mût sø nghiên cău cho thçy sĆ có mặt cþa

PPV1 trong máu không phĀ thuûc vào hàm

497

Sự hiện diện của Porcine Parvovirus 1 (PPV1) ở lợn nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận

lāợng kháng thể đặc hiệu kháng PPV1 (Streck

& cs., 2011; Dias & cs., 2013). Trong khuôn khù

cþa nghiên cău, chúng tôi chõn Ċ múi tînh 3

méu huyết thanh có hiệu giá HI khác nhau để

phát hiện hiện tāợng virus huyết bìng phāćng

pháp PCR. Kết quâ PCR xác đðnh PPV1 trong

méu huyết thanh đāợc minh hõa Ċ hình 2 và

tùng hợp Ċ bâng 1.

4096

2048

1024

512

256

128

Mức thấp

Mức cao

Hiệu giá HI (1/x)

Hình 1. Hiệu giá kháng thể kháng PPV1 ở mẫu huyết thanh lợn thịt

5 6 M 7 8 (-) (+)

Ghi chú: M là thang ADN chuẩn với khoảng cách giữa các vạch là 100bp. Các mẫu huyết thanh xét nghiệm được

bố trí ở giếng số 5 đến số 8. Các vạch sản phẩm PCR không đặc hiệu được đánh dấu “*”, “**”.Vạch sản phẩm đặc

hiệu (265 bp) được đánh dấu bởi ký hiệu “>”.

Hình 2. Minh họa kết quâ phân ứng PCR phát hiện PPV1

498

Nguyễn Văn Giáp, Mai Thị Ngân, Lê Văn Trường, Vũ Thị Ngọc,

Võ Văn Hiểu, Tạ Thị Kim Chung, Vũ Đức Hạnh, Huỳnh Thị Mỹ Lệ

chën nuöi khác nhau và khöng phĀ thuûc vào

hàm lāợng kháng thể dðch thể đặc hiệu (Streck

& cs., 2011). Nhên xét này cho thçy sĆ cæn thiết

kết hợp phāćng pháp huyết thanh hõc và

phāćng pháp PCR trong nghiên cău sĆ lāu

hành virus. Mặc dù vêy, hän chế cþa nghiên cău

hiện thĈi là chāa xét nghiệm đāợc toàn bû sø

méu huyết thanh lợn thðt bìng phân ăng PCR,

nên không thể kết luên đæy đþ về hiện tāợng

nhiễm virus huyết.

Kết quâ Ċ hình 2 cho biết, Ċ các méu Ċ giếng

sø 5, 6 và 7 xuçt hiện väch đặc hiệu vĉi kích

thāĉc 265bp. Méu Ċ giếng sø 8 xuçt hiện mût sø

väch PCR cò kích thāĉc khöng đặc hiệu và đāợc

đánh giá là âm tính. Tùng hợp kết quâ PCR

phát hiện PPV1 đāợc trình bày Ċ bâng 1.

Có 10/18 méu huyết thanh xét nghiệm

dāćng tính và 8/18 méu âm tính vĉi PPV1. Các

méu dāćng tính thu thêp Ċ 5 trang träi täi 4

tînh là Vïnh Phýc, Bíc Ninh, Hāng Yên và Hâi

Dāćng (Bâng 1). Nhā vêy, câ phân ăng huyết

thanh hõc và PCR đều phát hiện sĆ lāu hành

PPV1 Ċ lợn giai đoän nuôi thðt (nhóm lợn không

bao giĈ đāợc vacxin phòng bệnh do PPV1). Kết

quâ phån tích phāćng sai (ANOVA) cho thçy

hiệu giá HI giąa nhóm có virus huyết (PCR

dāćng tính) và nhóm không có virus huyết (PCR

âm tính) không có sĆ khác biệt (giá trð F lý

thuyết = 1,59< F_{thĆc nghiệm}Ċ măc P = 0,22>0,05).

Kết quâ trên phù hợp vĉi kết luên: PPV1 lāu

hành Ċ lợn đāợc nuöi dāĉi nhiều phāćng thăc

3.3. Phân tích trình tự gen mã hóa

protein NS1

Đặc điểm cþa các chþng PPV1 phát hiện

trong nhóm méu xét nghiệm đāợc nghiên cău

såu hćn dĆa vào phân tích trình tĆ gen. Trên cć

sĊ phân tích măc tāćng đ÷ng nucleotide dõc

chiều dài gen mã hóa protein NS1 cþa các chþng

PPV1 trên thế giĉi, đã xác đðnh đæu 3’ cþa gen

NS1 (tĂ nucleotide 1400 trĊ đi) cò măc tāćng

đ÷ng thçp hćn so vĉi vùng còn läi (Hình 3).

Bâng 1. Kết quâ PCR phát hiện PPV1 trong huyết thanh

Ký hiệu thực địa

VP2-12

Địa điểm lấy mẫu

Vĩnh Phúc

Bắc Ninh

Hưng Yên

Hòa Bình

Hà Nội

Mã sốtrang trại

Hiệu giá HI(1/x)

Kết quả PCR

/512

/64

VP2-13

VP2-15

BN2-17

/64

BN2-18

BN11-45

HY12-41

HY12-42

HY12-45

HB14-0403

HB15-0401

HB15-0405

HN15-42

HN18-0401

HN18-0406

HD18-45

HD2-15

/128

/16

/32

/256

/128

/16

/32

/512

/32

/16

Hà Nội

Hải Dương

HD2-195

Ghi chú: 10 mẫu dương tính PPV1 được giải trình tự gen NS1 có thứ tự như sau: 1-7, 9, 17 và 18.

499

Sự hiện diện của Porcine Parvovirus 1 (PPV1) ở lợn nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận

1.0

0.98

0.96

0.94

Mức tương đồng cao > 96% (vùng 1)

0.92

0.9

Mức tương đồng thấp so với vùng 1

0.88

0.86

Vị trí sản phẩm

PCR nhân lên bởi

mồi PPVF/PPVR

0.58

0.56

0.54

0.52

0.5

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1,000

1,100

1,200

1,300

1,400

1,500

1,600

1,700

1,800

1,900

Vị trí nucleotide trung tâm

Hình 3. Kết quâ phân tích tương đồng trình tự nucleotide của gen NS1

1470

1480

1490

1500

1510

1520

1530

1540

1550

1560

1570

.... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....

D00623_NADL-2_USA_1976

U44978_Kresse_USA_1985

GTTAGAATAGGATGCGAGGAAAGACCAGAACATACACAACCAATAAGAGACAGAATGTTAAACATAAACCTAACCAGAAAACTGCCAGGTGATTTTGGACTTTTAGAAGA

..............................................................................................................

AY684866_Challenge_Germany_198 ................................C.............................................................................

AY684871_27a_Germany

VP2-12_VinhPhuc_A

VP2-13_VinhPhuc_A

VP2-15_VinhPhuc_A

BN2-17_BacNinh_B

BN2-18_BacNinh_B

BN11-45_BacNinh_C

HY12-41_HungYen_D

HY12-45_HungYen_D

HD2-15_HaiDuong_J

HD2-195_HaiDuong_J

..............................................................................................................

1580

1590

1600

1610

1620

1630

1640

1650

1660

1670

1680

.... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....

D00623_NADL-2_USA_1976

U44978_Kresse_USA_1985

AACTGAATGGCCACTAATATGTGCTTGGTTGGTAAAGAAAGGTTACCAAGCAACAATGGCTAGCTATATGCATCATTGGGGAAATGTACCTGATTGGTCAGAAAAATGGG

...................................................................................................C..........

AY684866_Challenge_Germany_198 ..............................................................................................................

AY684871_27a_Germany

VP2-12_VinhPhuc_A

VP2-13_VinhPhuc_A

VP2-15_VinhPhuc_A

BN2-17_BacNinh_B

BN2-18_BacNinh_B

BN11-45_BacNinh_C

HY12-41_HungYen_D

HY12-45_HungYen_D

HD2-15_HaiDuong_J

HD2-195_HaiDuong_J

........................................................................................................G.....

..............................................................................................................

1690

1700

1710

1720

1730

.... .... .... .... .... .... .... .... ...

D00623_NADL-2_USA_1976

U44978_Kresse_USA_1985

AGGAGCCAAAAATGCAAACCCCAATAAATACACCAACAGACTCT

............................................

AY684866_Challenge_Germany_198 ............................................

AY684871_27a_Germany

VP2-12_VinhPhuc_A

VP2-13_VinhPhuc_A

VP2-15_VinhPhuc_A

BN2-17_BacNinh_B

BN2-18_BacNinh_B

BN11-45_BacNinh_C

HY12-41_HungYen_D

HY12-45_HungYen_D

HD2-15_HaiDuong_J

HD2-195_HaiDuong_J

...........................................A

....T.......................................

............................................

....T.......................................

BN2-17

BN2-18

Trang trại B, tỉnh Bắc Ninh

Ghi chú: (A) Kết quả so sánh trình tự nucleotide PPV1 của Việt Nam (đánh dấu) với các chủng đại diện. Dấu “.”

biểu thị các vị trí có nucleotide giống với chủng tham chiếu NADL-2; (B) Giản đồ giải trình tự tại vị trí đa hình

nucleotide 1694 G- T của 2 chủng PPV1 thu được ở cùng trang trại B.

Hình 4. Trình tự nucleotide của phân đoạn gen mã hóa protein NS1

Trong khi đò đoän gen đāợc nhân lên trong

phân ăng PCR phát hiện virus nìm trong vùng

có măc tāćng đ÷ng thçp kể trên. Do vêy, sân

phèm PCR phát hiện PPV1 đāợc dùng giâi mã

phån đoän gen NS1 cþa 10 méu dāćng tính

PPV1 (Bâng 1). Hình 4 trình bày kết quâ giâi

mã gen cþa 10 chþng PPV1.

Kết quâ Ċ hình 4 cho thçy 10 chþng PPV1

thĆc đða Ċ Việt Nam có trình tĆ phån đoän gen

NS1 ít thay đùi, vĉi măc tāćng đ÷ng rçt cao tĂ

500

Nguyễn Văn Giáp, Mai Thị Ngân, Lê Văn Trường, Vũ Thị Ngọc,

Võ Văn Hiểu, Tạ Thị Kim Chung, Vũ Đức Hạnh, Huỳnh Thị Mỹ Lệ

99,7% đến 100%. Ở phån đoän gen NS1 dài 263

hành trên thð trāĈng Việt Nam. Do vêy, kết quâ

PCR và giâi trình tĆ gen khîng đðnh sĆ lāu

hành cþa virus chþng thĆc đða Ċ lợn täi mût sø

tînh miền Bíc. Cùng vĉi kết quâ công bø gæn

đåy về sĆ lāu hành các genotype parvovirus Ċ

lợn nuôi täi miền Trung (Nguyen Tran Trung &

cs., 2019) cho thçy PPV1 có mặt Ċ nhiều

tînh/thành phø trong câ nāĉc.

nucleotide (nghiên cău này), chî có 1 vð trí đa

hình nucleotide là 1694 G-T (Hình 4B). So vĉi 4

chþng tham chiếu (Kresse, 27a, Challenge và

NADL-2), 10 chþng cþa Việt Nam có măc tāćng

đ÷ng trình tĆ nucleotide tøi thiểu là 98,8%. Đặc

tính tāćng đ÷ng cao về trình tĆ nucleotide là do

gen mã hóa NS1 có tính bâo thþ cao hćn, tøc đû

biến đùi thçp hćn so vĉi gen mã hóa capsid

protein (Ren & cs., 2013; Meszaros & cs., 2017).

Theo danh mĀc thuøc thý y đã đāợc cçp phép

lāu hành täi Việt Nam (CĀc Thú y, 2019), chî

có vacxin vô hoät phòng bệnh do PPV1 gåy ra lāu

Nghiên cău này tiếp tĀc xác đðnh møi quan

hệ di truyền giąa các chþng PPV1 thĆc đða bìng

phāćng pháp phån tích cåy phát sinh chþng loäi

(Hình 5).

Nhóm

di truyền

Tên chủng

Amino acid NS1

553

564

577

0,83

Ghi chú: giá trị bootstrap được biểu diễn theo thang đo 0-1 tương ứng với mức 0-100%. Ký hiệu 10 chủng PPV1

của Việt Nam theo quy tắc: tên chủng, địa điểm lấy mấu (tînh) và trang trại lấy mẫu (chữ cái A-J). Trình tự

amino acid đính kèm tương ứng cho mỗi chủng PPV1 nhằm làm rõ khác biệt đột biến D/E ở amino acid 564

protein NS1.

Hình 5. Cây phát sinh chủng loại của PPV1 dựa vào phân đoạn gen mã hóa protein NS1

501

Sự hiện diện của Porcine Parvovirus 1 (PPV1) ở lợn nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận

parvoviruses in South Korea in 2018. BMC

Veterinary Research. 16(1): 113.

Kết quâ xây dĆng cây phát sinh chþng loäi

bao g÷m các trình tĆ tham chiếu đã biết nhóm

di truyền (Hình 5) cho thçy có 4 nhóm di truyền

(nhóm 1-4) cþa PPV1 giøng nhā cöng bø trāĉc

đåy (Hao & cs., 2011). DĆa vào đặc điểm phân

nhòm, đã xác đðnh 10/10 chþng PPV1 đāợc giâi

trình tĆ trong nghiên cău này thuûc về nhóm 1.

Nhóm 1 này g÷m các chþng phát hiện đāợc Ċ

nhiều nāĉc thuûc châu Mỹ (NADL-2, Kresse),

châu Âu (Challenge) và châu Á (SR-1, N2). Có

9/10 chþng cþa Việt Nam (trĂ chþng BN2-17)

nìm cùng nhánh vĉi chþng N2 cþa Hàn Quøc

(đòng khung, hình 5). Nhòm này mã hòa

aspartic (D) Ċ amino acid 564 và khác biệt so vĉi

47 chþng PPV1 mã hòa glutamic (E) (đánh dçu

màu xám, hình 5). Cho đến nay, các đût biến

ânh hāĊng tĉi đặc tính sinh hõc cþa parvovirus

chþ yếu têp trung Ċ capsid protein (Meszaros &

cs., 2017; Oh & cs., 2017). Do đò, cæn nghiên cău

thêm đặc điểm di truyền gen mã hóa capsid

protein cþa các chþng PPV1 phát hiện đāợc Ċ

Việt Nam.

Cục Thú y (2019). Danh mục thuốc thú y đã được cấp

phép lưu hành tại Việt Nam (phụ lục 1A, 1B). Truy

cập từ http://cucthuy.gov.vn/Pages/danh-muc-

thuoc-thu-y-da-duoc-cap-giay-chung-nhan-luu-

hanh-tai-viet-nam-.aspx, ngày 31/12/2019.

Dias A.S., Gerber P.F., Araujo A.S., Auler P.A.,

Gallinari G.C. & Lobato Z.I.P. (2013). Lack of

antibody protection against Porcine circovirus 2

and Porcine parvovirus in naturally infected dams

and their offspring. Research in Veterinary

Science. 94(2): 341-345.

Ellis J.A., Bratanich A., Clark E.G., Allan G., Meehan

B., Haines D.M., Harding J., West K.H.,

Krakowka S., Konoby C., Hassard L., Martin K. &

Mcneilly F. (2000). Coinfection by porcine

circoviruses and porcine parvovirus in pigs with

naturally acquired postweaning multisystemic

wasting syndrome. Journal of Veterinary

Diagnostic Investigation. 12(1): 21-27.

Hao X., Lu Z., Sun P., Fu Y., Cao Y., Li P., Bai X.,

Bao H., Xie B., Chen Y., Li D. & Liu Z. (2011).

Phylogenetic analysis of porcine parvoviruses from

swine samples in China. Virology Journal. 8: 320.

Hồ Đình Chúc, Nguyễn Thị Phương Đông & Trần Duy

Khanh (1995). Tình hình hội chứng rồi loạn sinh

sản của lợn nái ở Thái Bình. Tạp chí Thú y. 1: 1-4.

4. KẾT LUẬN

Joo H.S., Donaldson-Wood C.R. & Johnson R.H.

(1976).

standardised

haemagglutination

Có mût tỷ lệ cao (88,2%) méu huyết thanh

lợn thðt dāćng tính vĉi kháng thể kháng PPV1.

Hiện tāợng virus huyết đã phát hiện Ċ 10/18

méu vĉi đặc điểm không phĀ thuûc vào hàm

lāợng kháng thể kháng PPV1. Kết quâ giâi mã

mût phæn gen NS1 cho biết 10 chþng PPV1 cþa

Việt Nam thuûc nhóm di truyền 1, g÷m các

chþng phát hiện đāợc Ċ nhiều nāĉc thuûc châu

Mỹ, châu Âu và châu Á.

inhibition test for porcine parvovirus antibody.

Australian Veterinary Journal. 52(9): 422-424.

Lemoine F., Domelevo Entfellner J. B., Wilkinson E.,

Correia D., Davila Felipe M., De Oliveira T. &

Gascuel O. (2018). Renewing Felsenstein's

phylogenetic bootstrap in the era of big data.

Nature. 556(7702): 452-456.

Letunic I. & Bork P. (2019). Interactive Tree of Life

(iTOL) v4: recent updates and new developments.

Nucleic Acids Research. 47(W1): W256-W259.

Lole K.S., Bollinger R.C., Paranjape R.S., Gadkari D.,

Kulkarni, S.S., Novak N.G., Ingersoll R., Sheppard

H.W. & Ray S.C. (1999). Full-length human

immunodeficiency virus type 1 genomes from

subtype C-infected seroconverters in India, with

evidence of intersubtype recombination. Journal of

Virology. 73(1): 152-160.

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Bergeron J., Menezes J. & Tijssen P. (1993). Genomic

organization and mapping of transcription and

translation products of the NADL-2 strain of

porcine parvovirus. Virology. 197(1): 86-98.

Cadar D., Dan A., Tombacz K., Lorincz M., Kiss T.,

Becskei Z., Spinu M., Tuboly T. & Csagola A.

(2012). Phylogeny and evolutionary genetics of

porcine parvovirus in wild boars. Infection,

Genetics and Evolution. 12(6): 1163-1171.

Mayr A., Bachmann P.A., Siegl G., Mahnel H. &

Sheffy B.E. (1968). Characterization of a small

porcine DNA virus. Arch Gesamte Virusforsch.

25(1): 38-51.

Chung H.C., Nguyen V.G., Huynh T.M., Park Y.H.,

Park K.T. & Park B.K. (2020). PCR-based

detection and genetic characterization of porcine

Meszaros I., Olasz F., Csagola A., Tijssen P. & Zadori

Z. (2017). Biology of Porcine Parvovirus

(Ungulate parvovirus 1). Viruses. 9(12): 393.

502

Nguyễn Văn Giáp, Mai Thị Ngân, Lê Văn Trường, Vũ Thị Ngọc,

Võ Văn Hiểu, Tạ Thị Kim Chung, Vũ Đức Hạnh, Huỳnh Thị Mỹ Lệ

Nguyen L.T., Schmidt H.A., Von Haeseler A. & Minh

Ren X., Tao Y., Cui J., Suo S., Cong Y. & Tijssen P.

(2013). Phylogeny and evolution of porcine

parvovirus. Virus Research. 178(2): 392-397.

B.Q. (2015). IQ-TREE: a fast and effective

stochastic algorithm for estimating maximum-

likelihood phylogenies. Molecular Biology and

Evolution. 32(1): 268-274.

Saekhow P. & Ikeda H. (2015). Prevalence and

genomic characterization of porcine parvoviruses

detected in Chiangmai area of Thailand in 2011.

Microbiology and Immunology. 59(2): 82-88.

Nguyen Tran Trung, Tran Quoc Dung, Dinh Thi Ngoc

Thuy, Vu Thi Tien, Do Vo Anh Khoa & Nguyen

Thi Dieu Thuy (2019). Detection of porcine

parvovirus (PPV) in pigs in central provinces of

Viet Nam. Journal of Animal Husbandry Sciences

and Technics. 249: 110-115.

Stojanac N., Gagrčin M., Stevančević O., Stančić I. &

Potkonjak A. (2012). Passive and active immunity

against parvovirus infection in piglets. African

Journal of Biotechnology. 11(30): 7771-7774.

Oh W.T., Kim R.Y., Nguyen V.G., Chung H.C. & Park

B.K. (2017). Perspectives on the evolution of

porcine parvovirus. Viruses. 9(8): 196.

Streck A., Gava D., Souza C., Gonçalves K.,

Bortolozzo F., Wentz I. & Canal C. (2011).

Presence of porcine parvovirus in sera from pigs is

independent of antibody titers. Berl Munch

Tierarztl Wochenschr. 124: 242-246.

Oravainen J., Heinonen M., Tast A., Virolainen J. &

Peltoniemi O. (2005). High porcine parvovirus

antibodies in sow herds: prevalence and associated

factors. Reproduction in Domestic Animals.

40(1): 57-61.

Xing X., Zhou H., Tong L., Chen Y., Sun Y., Wang H.

& Zhang G. (2018). First identification of porcine

parvovirus 7 in China. Archives of Virology.

163(1): 209-213.

Pozzi P.S. & Alborali G.L. (2012). Reproductive

diseases in sows (Sus scrofa domestica): a review.

Israel Journal of Veterinary Medicine. 67(1): 24-33.

Xu X.G., Chen G.D., Huang Y., Ding L., Li Z.C.,

Chang C.D., Wang C.Y., Tong D.W. & Liu H.J.

(2012). Development of multiplex PCR for

simultaneous detection of six swine DNA and

RNA viruses. Journal of Virological Methods.

183(1): 69-74.

Ranz A.I., Manclus J.J., Diaz-Aroca E. & Casal J.I.

(1989). Porcine parvovirus: DNA sequence and

genome organization. Journal of General Virology.

70(Pt 10): 2541-2553.

503

9 trang Hứa Trọng Đạt 09/01/2024 17240 Free

Download

Bạn đang xem tài liệu "Sự hiện diện của Porcine parvovirus 1 (PPV1) ở lợn nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận", để tải tài liệu gốc về máy hãy click vào nút Download ở trên

File đính kèm:

su_hien_dien_cua_porcine_parvovirus_1_ppv1_o_lon_nuoi_tai_ha.pdf