Xác định một số gen kháng kháng sinh của vi khuẩn Escherichia Coli O157: H7 phân lập từ trâu bò khỏe mạnh tại một số tỉnh Nam Trung Bộ
XÁC ĐỊNH MỘT SỐ GEN KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN
ESCHERICHIA COLI O157: H7 PHÂN LẬP TỪ TRÂU BÒ KHỎE MẠNH TẠI
MỘT SỐ TỈNH NAM TRUNG BỘ
Bùi Thị Ba, Đào Hoài Thu, Võ Thành Thìn,
Đặng Văn Tuấn, Đỗ Văn Tấn, Vũ Khắc Hùng
Phân viện thú y Miền Trung
TÓM TẮT
Chúng tôi phân tích gen kháng sinh của 34 chủng vi khuẩn E. coli O157:H7 phân lập từ
trâu bò khỏe mạnh tại một số tỉnh Nam Trung bộ. Tất cả các chủng vi khuẩn đều mang ít nhất 1
gen kháng kháng sinh. Trong đó, tỷ lệ các chủng mang các gen kháng với nhóm Sulfonamide là
cao nhất (67,65%), tiếp theo là nhóm β-lactam (64,7%), Aminoglycoside (55,88%), Tetracycline
và Phenicol cùng chiếm (38,24%) và Quinolone (32,35%). Đây là những kết quả đầu tiên về gen
kháng kháng sinh ở vi khuẩn E. coli O157:H7 phân lập từ trâu bò khoẻ mạnh tại Việt Nam.
Từ khóa: E. coli O157:H7,, Gen kháng kháng sinh, Trâu bò, Nam Trung Bộ
Genetic analysis of antimicrobial resistance in Escherichia coli O157:H7 isolated
from healthy cattle and buffaloes in Central Vietnam
Bui Thi Ba, Dao Hoai Thu, Vo Thanh Thin,
Dang Van Tuan, Do Van Tan and Vu Khac Hung
SUMMARY
We investigated and analyzed the antibiotic resistance genes of 34 E. coli O157:H7 strains
isolated from healthy cattle and buffaloes in Central region of Vietnam. The results showed that
most of the strains carried at least 1 antibiotic resistance gene. Among 34 strains, 23/34 (67.65%)
strains possessed sulfonamide resistance genes. The amount of strains carried β-lactam resistance
genes was 22/34 (64.7%) while this figure for aminoglycoside was 19/34 (55.88%); tetracycline
and phenicol were the same (13/34) (38.24%) and quinolone was the lowest (11/34) (32.35%).
According to our knowledge, this is the first report investigated the prevalence of antimicrobial
resistance genes in E. coli serotype O157:H7 isolated from healthy cattle and buffaloes in
Vietnam.
Key words: E.coli O157:H7, Antibiotic resistance gên, Cattle, Central Vietnam
I.
ĐẶT VẤN ĐỀ
Vi khuẩn Escherichia coli O157:H7 là nguyên nhân chính gây ra một số bệnh nguy hiểm
cho con người như: hội chứng urê huyết (HUS: hemolytic uremic syndrome), hội chứng viêm kết
tràng xuất huyết (HC: hemorrhagic colitis). Động vật nhai lại được xem là vật mang vi khuẩn này
(Friedrich và cs, 2002; Beutin và cs, 2004; Zheng và cs, 2005; Bielaszewska và cs, 2006; Prager
và cs, 2009). Sử dụng kháng sinh cho động vật là một trong những biện pháp quan trọng nhất để
hạn chế thiệt hại do vi khuẩn này gây ra. Tuy nhiên, trong những năm gần đây khả năng kháng
kháng sinh của vi khuẩn này đã gây ra nhiều khó khăn trong công tác điều trị bệnh. Để xác định
khả năng kháng sinh của vi khuẩn này ở mức độ phân tử chúng tôi sử dụng phản ứng PCR để
phân tích một số gen kháng kháng sinh thuộc các nhóm β-lactam, aminoglycoside, tetracycline,
sulfonamide, phenicol và quinolone ở các chủng vi khuẩn E.coli O157:H7 phân lập trên từ trâu
bò khỏe mạnh tại một số tỉnh Nam Trung bộ.
II. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Nội dung nghiên cứu
52
- Xác định một số gen kháng kháng sinh thuộc các nhóm β-lactam, aminoglycoside,
tetracycline, sulfonamide, phenicol và quinolone của vi khuẩn E.coli O157:H7.
2.2. Nguyên liệu nghiên cứu
- Các chủng vi khuẩn E.coli O157:H7 phân lập từ trâu, bò khỏe mạnh ở một số tỉnh Nam
Trung Bộ.
- Các chủng đối chứng dương mang một số gen kháng kháng sinh: do Phòng thí nghiệm
miễn dịch, khoa Thú y, trường Đại học Gent và Phòng thí nghiệm Ultrastructure, trường Đại học
Vrije-Brussel, Bỉ và Bộ môn Vi trùng, Phân viện thú y Miền Trung, cung cấp.
- Các loại hóa chất, sinh phẩm dùng trong phản ứng PCR do hãng Invitrogen cung cấp.
2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu
- ADN của vi khuẩn được chiết tách bằng phương pháp sốc nhiệt:
- Xác định gen kháng kháng sinh bằng phương pháp PCR theo Sunde và Norstrom (2006);
Ahmed và cs. (2009) với các cặp mồi đặt hiệu được mô tả trong bảng 1.
Bảng 1: Các cặp mồi dùng trong phản ứng PCR xác định gen kháng kháng sinh
Nhóm kháng sinh
Gen
Mồi
Trình tự nucleotide của mồi (5’- 3’)
Sản
phẩm
PCR (bp)
blaTEM -
blaTEM -
blaSHV -
blaSHV -
blaCMY -
blaCMY -
F
R
F
R
F
TTCTTGAAGACGAAAGGGC
ACGCTCAGTGGAACGAAAAC
CACTCAAGGATGTATTGTG
TTAGCGTTGCCAGTGCTCG
CTCAGGAATGAGTTACGAAGAGG
AATCCACCAGTGGAGCCC
TATCTACGAACTGGACCCTCTG
CATTGCTTCATTTGATCGGAT
GCAGCGCAATGACATTCTTG
ATCCTTCGGCGCGATTTTG
ACTTATGATGGGATACGGTC
CTCCATCAGCGTTTCAGCTG
CTGAGGATGGCAAGTATGGT
TCAATTCTCGTTCTCGCCTCAT
TTGGTCCTGAAGTGCCCTTAA
GCCGTCCATCGAGTGAACCAGT
CTGAGTAGTCCAAGACTTTA
ATAATCACTTGTCTCATGTG
TCTAACAATGCGCTCATCGT
GGTTGAAGGCTCTCAAGGGC
CACGTTGAGCCTCTATATGG
ATGCAGAAGTAGAACGCGAC
AGGGGGCAGATGTGATCGAC
TGTGCGGATGAAGTCAGCTCC
ATTTCTCACGCCAGGATTTG
GATCGGCAAAGGTTAGGTCA
GATCGTGAAAGCCAGAAAGG
ACGATGCCTGGTAGTTGTCC
ACGACATTCGTCAACTGCAA
TAAATTGGCACCCTGTAGGC
TTGCGATGCTCTATGAGTGGCTA
CTCGAATGCCTGGCGTGTTT
blaTEM
blaSHV
1150
885
β-Lactam
blaCMY
550
538
280
237
286
370
435
588
885
625
516
469
417
R
strA- strB Str-F
Str-R
aadA-F
aadA
aa(3)-II
aa(3)-IV
tetA
Amynoglycoside
aadA-R
Aa2-F
Aa2-R
Aa4-F
Aa4-R
TetA-F
TetA-R
TetB-F
TetB-R
tetC-F
tetC-R
Flo-F
Tetracyline
tetB
tetC
Phenicol
floR
Flo-R
Sulfonamide
sulII
SulII-F
SulII-R
qnrA-F
qnrA-R
qnrB-F
qnrB-R
qnrS-F
qnrS-R
qnrA
qnrB
qnrS
Quinolone
aac(6’)-
Ib-cr
Aac(6’)-F
aac(6’)-R
481
53
III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Cho đến nay có rất nhiều gen kháng kháng sinh đã được phát hiện, tuy nhiên, trong
nghiên cứu này chúng tôi chỉ xác định những gen kháng kháng sinh của 6 nhóm phổ biến
nhất trong điều trị bệnh do vi khuẩn Gram âm gây nên như: β-Lactam (blacTEM , blacSHV
,
blacCMY), Aminoglycoside (strA- strB, aadA, aac(3)-IV, aac(3)-II), Tetracycline (tetA,
tetC, tetB), Phenicol (floR ), Sulfonamic (sulII) và Quinolone (qnrA, qnrS, qnrB).
Bảng 2: Kết quả xác định gen kháng kháng sinh của vi khuẩn E. coli O157: H7
Nhóm kháng
Gen
Số chủng
Số chủng
Tỷ lệ dương tính
sinh
kiểm tra
34
dương tính
(%)
64,70
11,76
11,76
64,70
20,59
29,41
26,47
blacTEM
blacSHV
blacCMY
blacTEM/BlacSHV/BlacCMY
strA- strB
aadA
aac(3)-II
aac(3)-IV
strA- strB/ aadA/ aac(3)-II/
aac(3)-IV*
tetA
tetB
tetC
tetA/ tetB/ tetC *
floR
sulII
qnrA
22
4
4
22
7
10
9
β-Lactame
Aminoglycoside
Tetracycline
34
34
34
34
34
34
34
34
*
1
19
2,94
55,88
34
34
34
34
34
34
34
34
34
34
34
3
12
1
13
13
23
2
8
4
0
11
8,82
35,29
2,94
38,24
38,24
67.65
5,82
23,53
11,76
0
Phenicol
Sulfonamide
qnrB
qnrS
Quinolone
Aac(6’)-Ib-cr
qnrA/ qnrB/ qnrS/ Aac(6’)-
Ib-cr*
32,35
* Mang ít nhất một gen.
● Gen mã hóa β-Lactam
Kết quả xác định gen kháng kháng sinh nhóm β-Lactam cho thấy có 22/34 (64,70%)
chủng vi khuẩn E.coli O157:H7 phân lập từ trâu bò khoẻ mạnh có khả năng sản xuất ít
nhất 1 loại enzyme β-Lactamase (bảng 2). Trong đó, cao nhất là gen blaTEM (64,70%),
khuẩn sản sinh enzyme β-Lactamase- SHV- có khả năng đề kháng với kháng sinh thuộc
nhóm penicillin và nhóm cephalosporin thế hệ thứ nhất; enzyme β-Lactamase-SHV,
enzyme β-Lactamase- OXA, enzyme β-Lactamase- CTX-M đề kháng với Oxyimio-
cephalosporin như cefotaxime, ceftazidime, cefpodoxime và ceftriaxone; β-Lactamase-
CMY đề kháng với 7-α-methoxycephalosporin như cefoxitin và cefotetan.
54
Hình 1: Kết quả điện di xác định gen blaTEM.
● Gen kháng kháng sinh nhóm Aminoglycoside
Gen kháng kháng sinh của vi khuẩn Gram âm thường nằm trên intergron class 1 và
class 2. Đây là những đoạn ADN có thể chèn vào phức hợp gen kháng kháng sinh bằng hệ
thống tái tổ hợp đặc hiệu (Mazel, 2006) [Error! Reference source not found.]. Các
integron thường liên kết với transposon Tn& và mang gen mã hoá cho enzyme
Dihydrofolate reductase (drfA), Streptothricin acetyltransferase (sat) và Aminoglycoside
adenyltranferase ( strA, strB, aadA, aac(3)). Những enzyme này giúp cho vi khuẩn Gram
âm đề kháng với các kháng sinh nhóm aminoglycoside như trimethoprim (drfA),
streptothricin và streptomycine/ Spectinomycine (strA, strB, aadA), gentamycin và
Phân tích các gen strA/ StrB, aadA, aac(3)-II và aac(3)-IV trên 34 chủng E.coli
O157:H7 phân lập từ trâu, bò khoẻ mạnh chúng tôi thấy có 19 chủng (55,88%) mang ít
nhất một gen đề kháng với nhóm kháng sinh aminoglycoside. Trong đó, tỷ lệ các chủng
mang gen aadA là cao nhất (29,41%), tiếp theo là các chủng mang gen aac(3)-II
(26,47%), strA- strB (20,59%) và thấp nhất là các chủng gen aac(3)-IV (2,94%). Kết quả
của chúng tôi thấp hơn so với kết quả kiểm tra các gen kháng sinh ở các chủng E.coli
phân lập từ lợn con tiêu chảy của Võ Thành Thìn và cs (2012), trong đó tỷ lệ gen kháng
aminoglycoside trong nghiên cứu của các tác giả này là 98,37%. Sở dĩ có sự khác biệt này
theo chúng tôi là do trong chăn nuôi lợn có nhiều loại kháng sinh (trong đó có nhóm
aminoglycoside) được bổ sung vào thức ăn nên tỷ lệ các chủng vi khuẩn kháng kháng
sinh cao hơn so với các chủng vi khuẩn phân lập từ trâu bò.
55
Hình 2: Kết quả điện di xác định gen strA-strB và gen aac(3)-II.
● Gen kháng kháng sinh họ Tetracycline
Tetracycline là một kháng sinh phổ rộng có tác dụng kìm khuẩn do ức chế quá trình tổng
hợp protein của vi khuẩn. Cho tới nay có hơn 60 gen kháng tetracyclin (tet) đã được xác
định và giải trình tự nucleotic. Tuy nhiên, có 3 trong số những gen thường gặp nhất là
Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy đối với các gen tetA, tetB và tetC trên 34 chủng
vi khuẩn E. coli O157:H7 phân lập từ trâu, bò khoẻ mạnh ở một số tỉnh Nam Trung bộ có
13/34 chủng mang ít nhất một gen kháng tetracyline. Trong đó, cao nhất số chủng mang
gen tetB, chiếm 13 (35,29%), số chủng mang gen tetA là 3 (8,82%) và 1 (2,94%) chủng
mang gen tetC. Kết quả này cao hơn so với kết quả kiểm tra bằng phương pháp phenotype
của Nguyễn Trọng Hải và cs (2011), chỉ có 30% số chủng kháng tetracycline. Điều này
chứng tỏ một số chủng vi khuẩn mang gen kháng kháng sinh nhưng chưa biểu hiện ở kiểu
hình bên ngoài. Kết quả này của chúng tôi cũng cao hơn so với kết quả nghiên cứu của
Wilkerson và cs. (2004) về vi khuẩn E.coli O157:H7 trên trâu, bò tại miền Trung của phía
Tây Hoa Kỳ, chỉ có 43/663 (6,49%) chủng mang gen kháng Tetracycline (phenotype).
Tuy nhiên, kết quả nghiên cứu của tác giả này cũng khẳng định số chủng mang gen tetB là
cao nhất [8].
Hình 3: Kết quả điện di xác định gen tetB
● Gen kháng kháng sinh nhóm phenicol
Hiện nay, chloramphenicol đã bị cấm sử dụng trong chăn nuôi, thú y nhưng
Florphenicol là kháng sinh thế hệ mới có nguồn gốc từ Chloramphenicol. Nhóm nitro (-
56
NO2) của chloramphenicol được thay thế bằng gốc methyl-sulfonyl (-SO2CH3) trong tổng
hợp thiamphenicol, trong khi ở florfenicol dẫn xuất flo-thiamphenicol nhóm hydroxyl (-
OH) được thay thế bởi Flo (F) (Angela và cs., 2011). [Error! Reference source not
found.]. Hiện tượng nhiều loại vi khuẩn đề kháng với nhóm kháng sinh này cũng được
nhiều tác giả đề cập đến và chúng khá phổ biến. Gen floR là một trong những gen giúp vi
khuẩn đề kháng với chloramphenicol và flophenicol; được phát hiện lần đầu tiên trên vi
khuẩn Pasteurella piscicida. Năm 2000, Cloeckaert và cs. tìm thấy gen FloR trên vi
Hình 4: Kết quả điện di xác định gen floR
Kết quả phân tích gen floR cho thấy có 14 (41,17%) chủng E. coli O157:H7 phân lập
từ trâu bò khoẻ mạnh mang gen floR. Kết quả này cũng tương ứng với tỷ lệ phân tích
phenotype trước đây của chúng tôi.
● Gen kháng kháng sinh họ Sulfonamide
Hình 5: Kết quả điện di xác định gen sulII
Cũng như nhiều vi khuẩn khác, khả năng kháng kháng sinh nhóm sulphomedazole
của vi khuẩn E.coli là rất phổ biến.
57
Trong nghiên cứu này chúng tôi nhận thấy có 26 (76,47%) chủng vi khuẩn E. coli
O157:H7 phân lập từ trâu, bò khoẻ mạnh tại một số tỉnh Nam Trung Bộ mang gen sulII.
Kết quả này cho thấy E.coli O157:H7 cũng mang gen sulII phổ biến như ở loài E. coli nói
chung mà các tác giả trước đây đã nghiên cứu trên lợn (Boerlin và cs., 2008, Wu và cs.,
2010, Võ Thành Thìn và cs., 2011) [4, 16, 2].
● Gen kháng kháng sinh nhóm Quinolone
Gen kháng kháng sinh họ Quinolone (dòng ciprofloxacin) của vi khuẩn được phát
hiện và mô tả lần đầu tiên bởi Martínez và cs. (1998) [Error! Reference source not
found.]. Gen điều hòa quá trình này là qnr nằm trên plasmid pMG252 có khả năng truyền
ngang và sau này được gọi là qnrA (17). Cho đến nay đã có 6 gen được mô tả là kháng
Quinolone bao gồm qnrA (có 4 biến thể), qnrB (20 biến thể), qnrS (4 biến thể), aac (6 ')
Ib-cr, qnrC, qnrD (Cavaco, 2009) [Error! Reference source not found.]. Những gen
qnrA, qnrB, qnrS mã hoá protein của nhóm pentapeptide để làm mất hoạt tính diệt khuẩn
của enzyme aminoglycoside acetyltransferase với 2 thay đổi tại vị trí acid amin 102 và
Hình 6: Kết quả điện di xác định gen qnrS
Trong nghiên cứu này chúng tôi chỉ tiến hành xác định 4 gen phổ biến trên vi khuẩn
E. coli là qnrA, qnrB, qnrS, aac (6 ') Ib-cr. Qua phân tích gen kháng kháng sinh nhóm
Quinolone của 34 chủng E. coli O157:H7 phân lập từ trâu bò khỏe mạnh tại một số tỉnh
Nam Trung bộ chúng tôi thấy có 11 (32, 35%) chủng vi khuẩn mang ít nhất một gen
kháng với kháng sinh thuộc họ Quinolone. Trong đó, cao nhất là gen qnrB (23,53%), các
gen còn lại chiếm tỷ lệ thấp, cụ thể là: qnrS (11,76%), qnrA chiếm 5,82% và không có
chủng nào mang gen aac (6 ') Ib-cr. Kết quả này khác biệt với kết quả nghiên cứu của
Robicsek và cs. (2006c), Ahmed và cs. (2009). Kết quả nghiên cứu của các tác giả này
cho thấy tỷ lệ các chủng E.coli mang gen kháng kháng sinh nhóm quinolone là 2- 4%,
thấp hơn nhiều so với kết quả của chúng tôi. Sự khác biệt giữa tỷ lệ các chủng mang gen
ở nghiên cứu của chúng tôi với các kết quả có liên quan đến điều kiện dịch tễ của vùng
miền (tập quán chăn nuôi và kỹ thuật thú y).
Như vậy, một số gen kháng kháng sinh thuộc 6 nhóm thông dụng nhất trong điều trị
các bệnh do vi khuẩn Gram âm đã được chúng tôi kiểm tra trên các chủng vi khuẩn E. coli
serotype O157:H7 phân lập từ trâu bò tại một số tỉnh Nam Trung bộ. Kết quả cho thấy tất
58
cả vi khuẩn đều mang ít nhất một gen kháng kháng sinh. Theo kết quả nghiên cứu của
nhiều tác giả thì đa số các gen kháng kháng sinh nằm trên plasmid và có khả năng truyền
ngang cho các vi khuẩn khác. Vì vậy, chúng làm tăng khả năng kháng kháng sinh của vi
khuẩn và gây trở ngại cho công tác điều trị bệnh trong thú y và nhân y. Đây là vấn đề rất
đáng lo ngại. Vì vậy, chúng ta cần có những hướng dẫn cụ thể trong việc sử dụng kháng
sinh, kiểm tra sự tồn dư kháng sinh trong thực phẩm và kiểm tra khả năng kháng khuẩn
của các loại kháng sinh thường dùng để điều trị bệnh trên trâu bò. Đặc biệt, chúng ta cần
có những biện pháp về mặt dịch tễ để quản lý sự lây lan của những vi khuẩn mang gen
kháng kháng sinh như quản lý chất thải chăn nuôi, cần có những khu chăn nuôi riêng cho
từng loài động vật, đặc biệt là giữa những loài ít sử dụng kháng sinh với những loài
thường xuyên tiếp xúc với kháng sinh.
III. KẾT LUẬN
Đã xác định được một số gen kháng kháng sinh ở vi khuẩn E. coli serotype
O157:H7 bằng bằng phương pháp PCR. Tất cả các chủng vi khuẩn mang ít nhất một gen
kháng kháng sinh và có sự tương quan giữa kiểu gen và kiểu hình kháng kháng sinh. Có
một số chủng chưa bộc lộ kiểu hình nhưng đã mang gen tiềm ẩn. Tỷ lệ các chủng vi
khuẩn mang gen đề kháng nhóm sulfonamide là cao nhất (67,65%), tiếp theo là nhóm β-
lactam (64,7%), Aminoglicoside (55,88%), Tetracycline và Phenicol cùng chiếm 38,24% và thấp
nhất là nhóm Quinolone chiếm 32,35%.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Nguyễn Trọng Hải, Đào Hoài Thu, Phan Thị Hằng, Hồ Văn Hiệp, Nguyễn Thị Kim
Phụng, Đỗ Văn Tấn, Lê Đình Hải, Vũ Khắc Hùng, 2011. Xác định tỷ lệ nhiễm và khả
năng kháng kháng sinh của vi khuẩn Escherichia coli O157:H7 trên trâu, bò khỏe
mạnh ở một số tỉnh Nam Trung bộ, tạp chí Khoa học Kỹ thuật thú y tập XVIII, số 3:
31- 37.
2. Võ Thành Thìn, Lưu Thị Nguyệt Minh, Lê Đình Hải, Nguyễn Ngọc Nhiên, Vũ Khắc
Hùng, 2011. Phân tích một số gen kháng kháng sinh của vi khuẩn E. coli phân lập từ
lợn con mắc bệnh tiêu chảy. Tạp chí Khoa học Kĩ thuật thú y, tập 18, số 3, tr. 24-30.
3. Ahmed A. M.. Emad E .A. Younis, Osman S. A., Ishida Y., El-khodery S. A., and
Shimamoto T., 2009. Genetic analysis of antimicrobial resistance in Escherichia coli
Gene in Escherichia coli Isolated from Cattle Antimicrob. Agents Chemother, 44 (10),
2858-2860.
5. Enne V. I., Livermore D.M.,Stephen P., Hall L. M. C., 2001. Persistence of
sulphonamide resistance in Escherichia coli in the UK despite national prescribing
restriction, Lancet, 357, 1325–1328
6. Roberts M.C., 2005. Update on acquired tetracycline resistance genes, FEMS
59
7. Robicsek A., Jacoby G. A., Hooper D. C. (2006a). The worldwide emergence of
plasmid-mediated quinolone resistance. Lancet Infect. 6, 629–640.
Resistance and Distribution of Tetracycline Resistance Genes in Escherichia coli
O157:H7 Isolates from Humans and Bovines, Antimicrob. Agents Chemother, 48 (3),
1066-1067.
9. Wu S., Dalsgaard A., Hammerum A. M., Porsbo L. J., Jennes, L. B., 2010. Prevalence
and characterization of plasmids carrying sulphonamide resistance genes among
Escherichia coli from pigs, pig carcasses and human. Acta Vet Scand, 52, 47.
Nhận ngày 25-5-2012
Phản biện 2-6-2012
60
9 trang
08/01/2024
80000
Free
Bạn đang xem tài liệu "Xác định một số gen kháng kháng sinh của vi khuẩn Escherichia Coli O157: H7 phân lập từ trâu bò khỏe mạnh tại một số tỉnh Nam Trung Bộ", để tải tài liệu gốc về máy hãy click vào nút Download ở trên
File đính kèm:
- xac_dinh_mot_so_gen_khang_khang_sinh_cua_vi_khuan_escherichi.pdf
